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广东快乐10分最新开奖:硅膠柱層析的操作方法及注意事項

广东快乐10分选5计划 www.hclyd.icu 硅膠柱層析

一、硅膠柱層析的原理

   利用吸附原理,即利用硅膠對中藥混合物中各種成分吸附能力的差異,而使混合物中各成分得以分離的色譜方法。

二、硅膠柱層析的操作方法及注意事項

1、裝柱  

  操作要點:裝柱前柱底要墊一層脫脂棉以防吸附劑外漏。

有干法裝柱和濕法裝柱兩種方法

 (1)干法裝柱:將硅膠通過漏斗裝入柱內,中間不應間斷,形成一細流慢慢加入管內。也可用橡皮槌輕輕敲打柱硅膠柱使硅膠裝填連續均勻、緊密。柱裝好后,打開下端活塞,然后倒入洗脫劑洗脫以排盡柱內空氣,并保持一定液面。              

 (2)濕法裝柱:將最初準備使用的洗脫劑裝入柱內,打開下端活塞,使洗脫劑緩慢流出。然后把硅膠慢慢連續不斷地倒入柱內(或將硅膠與適量洗脫劑調成混懸液慢慢加入柱內,),硅膠依靠重力和洗脫劑的帶動,在柱內自由沉降,此間要不斷把流出的洗脫劑加回柱內保持一定的液面,直至把硅膠加完并在柱內沉降不再變動為止。然后在硅膠上面加一小片濾紙或少許脫脂棉。根據加樣量控制洗脫劑液面至一定高度。

      勻漿法: 攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系,就用石油醚拌;如果洗脫劑是氯仿/醇體系,就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿,說明溶劑中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,如果不與水配伍走分配色譜的話,必須預先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥,以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感,不能用氯仿體系過柱。

2、上樣

  將欲分離的樣品溶于少量裝柱時用的洗脫劑中,制成體積小、濃度高的樣品溶液,加入層析柱中硅膠面上。如樣品不溶于裝柱時用的洗脫劑,則將樣品溶于易揮發的溶劑中,并加入適量硅膠(不超過柱中硅膠全量的1/10)與其拌勻,除盡溶劑,將拌有樣品的硅膠均勻加到柱頂(始終保持洗脫劑有一定的液面),再覆蓋一層硅膠即可。

  上樣時注意沿著柱內壁慢慢加入,始終保持硅膠上端表面平整;上樣量為硅膠的1/60~1/30。

3、洗脫

  洗脫劑的選用可通過薄層色譜篩選,一般TLC展開時Rf 值為0.2~0.3的溶劑系統是最佳的洗脫系統,采用梯度洗脫法洗脫。

先打開柱下端活塞,保持洗脫劑流速1~2滴/秒。上端不斷添加洗脫劑(可用分液漏斗控制添加速度與下端流出速度相近)。如單一溶劑洗脫效果不好,可用混合溶劑洗(一般不超過三種溶劑),通常采用梯度洗脫。洗脫劑的洗脫能力由弱到強逐步遞增。

4、收集處理

等份收集洗脫液,每份收集量大概與所用硅膠的量相當。每份洗脫液采用薄層定性檢查,合并含相同成分的洗脫液。經濃縮、重結晶處理往往可得到某一單體成分。如仍為幾個單體成分的混合物,不易析出單體成分的結晶。則需要進一步層析或用其他方法分離。


注:(1)柱色譜分離能力比薄層分離能力強,效果更好,尤其對結構相似、性質接近、采用薄層難以分離的成分分離效果好。

(2) 洗柱子能不用含水的混合溶劑,就盡量不要用。